| 热带念珠菌β-葡聚糖合成酶KRE9基因原核表达及其比活力测定 |
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| 引用本文： | 刘政伟,李瑞芳,张瑞玲.热带念珠菌β-葡聚糖合成酶KRE9基因原核表达及其比活力测定[J].南方农业学报,2018,49(4):628-634. |
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| 作者姓名： | 刘政伟 李瑞芳 张瑞玲 |
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| 作者单位： | 河南工业大学 生物工程学院,郑州,450001 |
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| 摘 要： | 目的]原核表达热带念珠菌(Candida tropicalis MYA-3404)β-葡聚糖合成酶(KRE9),并进行酶比活力测定,为研究其结构和生物学功能提供参考.方法]提取热带念珠菌DNA,PCR扩增KRE9基因,构建其原核表达载体pET28a-KRE9后转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达及组氨酸(His)标签纯化树脂亲和柱纯化获得融合蛋白KRE9,并利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法测定其比活力.结果]克隆获得的KRE9基因全长816 bp,编码271个氨基酸,与参考基因序列(GenBank登录号XM_002547984)的相似性高达99.75%.将其原核表达载体pET28a-KRE9转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过诱导表达及纯化获得重组蛋白KRE9,经SDS-PAGE检测,发现其纯度较高,大小约35 kD.Western blotting鉴定结果显示,重组蛋白KRE9能与抗His抗体发生特异性结合.重组蛋白KRE9比活力为9.169×104U/mg.结论]重组蛋白KRE9具有良好的特异性和较高β-葡聚糖合成酶活性,可用于其结构和生物学功能研究.
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| 关 键 词： | β-葡聚糖合成酶(KRE9) 热带念珠菌 原核表达 纯化 比活力 |
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