产气荚膜梭菌ε毒素蛋白高效表达体系的构建及其免疫保护性的研究

中国畜牧兽医

产气荚膜梭菌ε毒素蛋白高效表达体系的构建及其免疫保护性的研究

卢田粉¹, 柴同杰¹, 孙玲玉¹, 李欣贤¹, 郝海玉¹, 吕长辉¹, 杨延伟²

1. 山东农业大学动物科技学院,山东泰安 271000;
2. 邹平县畜牧兽医局,山东滨州 256600

收稿日期:2012-03-12 出版日期:2012-09-20 发布日期:2012-09-18
通讯作者: 柴同杰(1957－),男,山东人,教授,博士生导师,主要从事环境微生物与分子细菌学研究。E-mail:chaitj117@163.com E-mail:chaitj117@163.com
作者简介:卢田粉(1987－),女,山东人,硕士生,主要从事环境微生物学及病原学研究。
基金资助:
中德国际合作项目"动物疫源性人畜共患病的检测"(2009DFA32890)。

Construction of Efficient Expression System of Clostridium perfringens Epsilon Toxin Protein and Analysis of its Immune Protection

LU Tian-fen¹, CHAI Tong-jie¹, SUN Ling-yu¹, LI Xin-xian¹, HAO Hai-yu¹, LV Chang-hui¹, YANG Yan-wei²

1. College of Animal Science and Technology, Shandong Agricultural University, Tai’an 271000, China;
2. Animal Husbandry Bureau of Zouping, Binzhou 256600, China

Received:2012-03-12 Online:2012-09-20 Published:2012-09-18

摘要/Abstract

摘要： ε毒素是由B和D型产气荚膜梭菌产生的,能够引起牛、羊肠毒血症,给畜牧业造成巨大的经济损失。本试验将ε毒素基因片段(972 bp)以正确的阅读框架定向连接到pET-28a(+)质粒上,然后将重组质粒导入受体菌株,成功构建重组菌株BL21(DE3)。SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,重组的菌株BL21(DE3)能以包涵体的形式高效表达ε毒素(占菌体总蛋白的32.83%)。在此基础上,用有效剂量0.2 mg包涵体粗提物免疫家兔,抗血清间接ELISA检测结果显示,在第4周抗体效价达到最高值为8.7log2。因此,在本研究中构建的重组菌株BL21(DE3)能高效表达ε毒素,而且该毒素具有较高的免疫保护性。

关键词: 产气荚膜梭菌; ε 毒素; 表达; 免疫保护性

Abstract: The epsilon toxin produced by type B and D Clostridium perfringens, could lead to fatal illness in a variety of livestock animals, causing financial loss. In this study, pET-28a(+) plasmid harboring epsilon toxin gene was transferred into E.coli strain BL21(DE3)to efficiently produce epsilon toxin.Results of SDS-PAGE and Western blotting showed that recombinant E.coli BL21(DE3) could highly expressed ε toxin (about 32.83% of total cellular protein). On this basis, rabbits were immunized with 0.2 mg of the insoluble recombinant protein to evaluate immune protection of the expressed epsilon protein. Results of indirect ELISA demonstrated that anti-ε antibody titer reached the maximum value, 8.7log2 in the fourth week. In conclusion, the recombinant strain BL21(DE3) could highly express ε toxin, and the toxin had excellent immune protection.

Key words: Clostridium perfringens; epsilon toxin; expression; immune protection

中图分类号:

S852.61

卢田粉, 柴同杰, 孙玲玉, 李欣贤, 郝海玉, 吕长辉, 杨延伟. 产气荚膜梭菌ε毒素蛋白高效表达体系的构建及其免疫保护性的研究[J]. 中国畜牧兽医.

LU Tian-fen, CHAI Tong-jie, SUN Ling-yu, LI Xin-xian, HAO Hai-yu, LV Chang-hui, YANG Yan-wei. Construction of Efficient Expression System of Clostridium perfringens Epsilon Toxin Protein and Analysis of its Immune Protection[J]. .

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