梅花鹿朊蛋白核心片段的基因克隆与高效表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (3): 78-80.

梅花鹿朊蛋白核心片段的基因克隆与高效表达

刘东¹, 卢士英¹, 李岩松^1,2, 李兆辉¹, 王光明¹, 张媛媛¹, 周玉¹, 宋杰¹, 柳增善¹, 任洪林¹

1. 人兽共患病研究教育部重点实验室吉林大学人兽共患病研究所畜牧兽医学院,吉林长春 130062;2. 吉林大学军需科技学院,吉林长春 130062

收稿日期:1900-01-01 修回日期:2011-12-16 出版日期:2012-03-20 发布日期:2012-03-20
通讯作者: 任洪林

Cloning and High-level Expression of a Core Fragment Gene of Prion Protein from Sika Deer (Cervus nippon)

LIU Dong¹, LU Shi-ying¹, LI Yan-song^1,2, LI Zhao-hui¹, WANG Guang-ming¹, ZHANG Yuan-yuan¹, ZHOU Yu¹, SONG Jie¹, LIU Zeng-shan¹, REN Hong-lin¹

1. Key Laboratory for Zoonosis Research, Ministry of Education, Institute of Zoonosis, College of Animal Science and Veterinary Medicine, Jilin University, Changchun 130062, China;2. College of Light Industry and Management Technology, Jilin University, Changchun 130062, China

Received:1900-01-01 Revised:2011-12-16 Online:2012-03-20 Published:2012-03-20

摘要/Abstract

摘要： 本试验根据梅花鹿朊蛋白基因序列设计引物,利用PCR的方法从梅花鹿基因组DNA中扩增朊病毒蛋白酶抵抗区域PrP^res,将该片段分别与表达载体pET-Trx和pET-His连接,构建重组表达载体pET-Trx-PrP^res和pET-His-PrP^res。分别将两个重组表达载体转入E.coli BL21(DE3) plys宿主菌中,37 ℃诱导4 h,经SDS-PAGE分析,Trx-PrP^res和His-PrP^res表达量分别为38.2%和30.1%。

关键词: 梅花鹿; 朊蛋白; 朊病毒; 蛋白酶抗性; 原核表达

Abstract: The gene of prion protein protease resistance fragment PrP^res of the Sika deer was amplified by PCR using a pair of specific primers. The product of PCR was cloned into the expression vectors of pET-Trx and pET-His. The restructuring plasmids were transformed into the host bacterium of E.coli BL21 (DE3) plys, at 37 ℃ for 4 h. SDS-PAGE result illustrated that fusion proteins of Trx-PrP^res and His-PrP^res were highly expressed. The expression level of fusion proteins were 38.2% and 30.1%, respectively.

Key words: Sika deer; prion protein; PrP^sc; proteinase resistant protein; prokaryotic expression

中图分类号:

刘东;卢士英;李岩松;李兆辉;王光明;张媛媛;周玉;宋杰;柳增善;任洪林. 梅花鹿朊蛋白核心片段的基因克隆与高效表达[J]. , 2012, 39(3): 78-80.

LIU Dong;LU Shi-ying;LI Yan-song;LI Zhao-hui;WANG Guang-ming;ZHANG Yuan-yuan;ZHOU Yu;SONG Jie;LIU Zeng-shan;REN Hong-lin. Cloning and High-level Expression of a Core Fragment Gene of Prion Protein from Sika Deer (Cervus nippon)[J]. , 2012, 39(3): 78-80.

[1]	任建乐, 林铱婷, 姬康, 谭姗姗, 陈新新, 晋怡, 王颖, 牛胜, 梁立滨, 李俊平, 赵宇军, 田文霞. A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(2): 678-688.
[2]	梁之瑄, 梅晨, 张雪, 徐浩钧, 支岩, 李焕荣, 王宏俊. 副鸡禽杆菌lpxM蛋白的原核表达及免疫原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(2): 719-727.
[3]	熊嘉琦, 贾梦乐, 杨领弟, 王毅豪, 孙静婷, 王婷, 黎美凤, 孔令保, 彭棋. 猴痘病毒A5L蛋白的原核表达及其免疫原性评价[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(1): 365-372.
[4]	陈旭, 董依萌, 邢秀梅, 杨苏坤, 刘欣. 梅花鹿SCF基因参与色素合成的作用研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(9): 3663-3670.
[5]	刘海翔, 张佩佩, 邓思, 秦英惠, 姚伦广. 大口黑鲈弹状病毒G蛋白胞外区原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(9): 3762-3770.
[6]	林乐丰, 刁云飞, 范冰峰, 刘理想, 邵静, 赵向远, 许保增. 基于高通量测序的梅花鹿卵巢衰老的转录组分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(8): 3157-3170.
[7]	索南吉, 李沛轩, 刘转霞, 王亭玮, 刘柯江, 谢东旭, 曾巍巍, 王雯慧. 双峰驼Cyp-A的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2896-2905.
[8]	罗世美, 赵瑶, 马鲜平, 张金阳, 易华山. 蓝舌病病毒NS4蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2923-2930.
[9]	豆玲, 李泽轩, 贾訸潇, 张彩云, 左富江, 李婷, 谢元江, 段晓雷. LwaCas13a蛋白的表达纯化与活性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2941-2950.
[10]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[11]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[12]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[13]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[14]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[15]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.