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普通小麦及其近缘种NCED基因的克隆及表达分析
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引用本文:李 康,聂小军,方桂英,王 乐,岳 华,佘奎军,宋卫宁.普通小麦及其近缘种NCED基因的克隆及表达分析[J].西北农业学报,2010,19(6):55~59
DOI:10.7606/j.issn.1004-1389.2010.06.-12
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作者单位
李 康1,聂小军1,方桂英1,王 乐1,岳 华1,佘奎军1,宋卫宁1,2 (1.西北农林科技大学 农学院陕西杨凌 712100
2.陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌 712100) 
基金项目:教育部高等学校科技创新工程重大项目培育基金项目(707054)。
中文摘要:利用已知的大麦NCED基因(dbj|BAF02837.1)保守区域设计引物,在野生一粒小麦、硬粒小麦、野生二粒小麦、普通小麦和粗山羊草中分别扩增出长度为782、782、782、783、783 bp的目的片断,生物信息学分析结果表明,均含有一个开放阅读框,编码242个氨基酸残基组成的蛋白,具有典型的9 顺式 新黄素加双氧酶蛋白的结构域。同源性比对结果表明,普通小麦与大麦的NCED序列具有高度同源性(97%);普通小麦及其近缘种在该区内NCED基因片段的同源性在95%以上。半定量RT PCR表达分析表明,NCED基因参与了普通小麦及其近缘种对非生物胁迫高渗、高盐的应答反应,但在不同物种或胁迫处理下的表达模式不同,其中粗山羊草和普通小麦在高渗和高盐胁迫下分别表现出了较快的应答反应。
中文关键词:普通小麦;9 顺式 环氧类胡萝卜素双加氧合酶  基因克隆;序列比较;表达分析
 
Cloning and Expression of a NCED Gene in Wheat and Its Relative Species
Abstract:A pair of specific degenerate primers was designed from the conservative domain of NCED in Hordeum vulgare,Oryza sativa,and Zea mays to amplify the NCED gene.782,782,782,783,and 783 bp fragments were amplified from Triticum boeoticum,Triticum dicoccoides,Triticum durum,Triticum aestivum,and Aegilops tauschii,respectively.The isolated fragments were cloned and sequeNCED,and 242 amino acid residues encoded by the longest open reading frame (OFR) in all were highly homological with the conserved domain of 9 cis epoxycarotenoiddioxygenase (NCED),which confirmed that the isolated fragment was the product of NCED gene.Compared nucleotide sequence between these five materials,the result showed that the similarities of each sequence higher than 95%.Real time quantitative PCR was performed to reveal that NCED was up regulated in abiotic stress (dehydration treatment and NaCl treatment).Aegilops tauschii and Triticum aestivum L.demonstrated faster response reaction under hyper osmotic and high salt stress respectively.
keywords:Wheat  9 cis epoxycarotenoiddioxygenase (NCED)  Gene cloning  Sequence alignment  Expression analysis
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